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高效液相色譜儀作為實驗室常用的分析型儀器,上手比較快,但有五個操作細節(jié)容易被忽略。即使是經(jīng)驗豐富的老分析員也會犯錯誤,導(dǎo)致一些儀器故障。
1、高效液相色譜儀流動相不過濾
因為塵?;蚱渌s質(zhì)會磨損柱塞、密封圈和單向閥,因此流動相預(yù)先用0.2um或0.45um濾膜過濾后再使用。流動相的溶劑濾頭要不定期清洗或更換。
2、高效液相色譜儀使用后沒有及時清洗
流動相中不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì),含有緩沖鹽的不應(yīng)留在高效液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi),由于蒸發(fā)或漏液,可能造成鹽類晶體析出,會堵塞密封圈和單向閥。
3、高效液相色譜儀流動相走空
泵工作時要防止流動相走空,否則泵空轉(zhuǎn)也會磨損柱塞桿和密封圈,造成漏液故障。
4、高效液相色譜儀沒有流動相流出,有無壓力
可能是泵內(nèi)有空氣,需要先排空,或使用注射器針筒抽出液體,還有可能性是密封圈磨損,需更換。
5、高效液相色譜儀壓力和流量不穩(wěn)
可能是有氣泡,或者是單向閥內(nèi)有異物,需要卸下單向閥,放在10%甲醇水,或者異丙醇超聲后再使用。
作為高效液相色譜儀的操作人員,一定要認真學(xué)習(xí)液相的說明書,熟練掌握軟件和硬件的操作,日常的維修,能夠獨立排除最基礎(chǔ)的故障并且維修。這樣才能延長高效液相色譜儀的使用壽命和工作品質(zhì)。
通用(深圳)儀器有限公司是一家專門從事液相色譜儀研發(fā),設(shè)計,生產(chǎn)與銷售的技術(shù)企業(yè),具有強大的研發(fā)及工程技術(shù)實力。產(chǎn)品有液相色譜、離子色譜儀、原子熒光光譜儀、血藥濃度分析儀,液相色譜的相關(guān)單元部件。想了解更多儀器設(shè)備,歡迎咨詢
色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。
?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩(如前所述)。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/p>
?、垡话阏f來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
?、苓x擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
⑤避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。
?、弑4嫔V柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長時間。
?、嗌V柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后,可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后,最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
液相色譜柱 液相色譜柱 液相色譜柱日常使用和維護_液相色譜柱 液相色譜作為工業(yè)生產(chǎn)和實驗研究過程中,運用較多的一種分析檢測設(shè)備,其色譜柱柱效高低會對樣品分析結(jié)果造成較大影響。因而如何提高液相色譜柱柱是實際工作運行過程中,不可避免的一大難題。在了解如何進行液相色譜柱柱效提高之前,對柱效值進行測算是需要了解的一大內(nèi)容。 液相色譜柱柱效值并不足以大部分預(yù)測其色譜柱性能,一般色譜柱性能是指色譜柱用于分離樣品的能力大小。而高柱效并不意味著能保證這種分離樣品能力。以下根據(jù)網(wǎng)上資料,對如何提高液相色譜柱柱效進行如下簡述: 1.通過降低液相色譜中移動相的流速,從而實現(xiàn)提高柱效,但此方法會導(dǎo)致延長設(shè)備的分析時長。