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液相色譜柱最初的硅酸巖原材料處理成水玻璃，進(jìn)而通過溶膠-凝膠等方法制備成多孔性硅膠微球，最后在硅膠表面進(jìn)行化學(xué)修飾，鍵合特定的基團，每一步都有研發(fā)人員辛勤的汗水和努力。
80年代，色譜研究人員創(chuàng)造性的將硅膠和有機聚合物的優(yōu)勢結(jié)合，通過在硅膠表面包覆一層聚合物薄膜，使內(nèi)部的硅膠基體不受影響，具有高機械強度和分析效率；同時表面的聚合物層保護顆粒在堿性條件下不會溶解（耐pH=10），阻隔硅膠中殘留的金屬及硅醇基與化合物的相互作用。進(jìn)入21世紀(jì)后，研究人員又開發(fā)了“雜化顆粒技術(shù)”，用烷基橋來取代連接在堿性條件下不穩(wěn)定的Si-O鍵。
從60年代di yi臺商品化的高壓液相色譜儀器的面世，液相色譜已經(jīng)歷了50多年的發(fā)展歷程，在這過程中，針對小分子的分離問題，衍生了全多孔顆粒和表面多孔顆粒的技術(shù)。
 高效液相色譜儀的原理：　　分配系數(shù)與組分、流動相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)（或稱交換系數(shù)），凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。　　在條件（流動相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時（Cs、Cm很?。r，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進(jìn)樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。 　　儀器使用：　　高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。　　與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離?！　PLC成為解決生化分析問題Z有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。　　液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。 　　該儀器應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域?！　?、分離混合物：高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)?！　⊥ㄟ^與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，高效液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)，能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離?！　?、生化分析：由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域，并已成為解決生化分析問題Z有前途的方法?！　?、儀器聯(lián)用：高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
【導(dǎo)讀】高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、

    高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢。近年來，在保健食品功效成分、營養(yǎng)強化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80％的有機化合物可以用HPLC來分析測定。

    高效液相色譜的分離過程HPLC，借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

    高效液相色譜儀操作步驟：

    1)過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

    2)對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

    3)打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀)，連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。

    4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進(jìn)入手動菜單。

    5)一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。

    6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

    7)設(shè)計走樣方法。點擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

    8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

    9)關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。

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